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時隔一年的今天，我又寫了一篇有關(guān)程序降溫儀的文章。不過這次想和大家探討的，是程序降溫儀配件使用的功能、必要性以及其他問題。

如前所述，盡管使用程序降溫儀可實現(xiàn)對降溫速率的“精細(xì)控制”，但在程序優(yōu)化的實際操作過程中，還是會遇到很多問題。

首先是配件方面，在這部分我將闡述配件的功能及其必要性。

曾有客戶問我是否需要使用樣本溫度探頭，對此我的回答是：需要，而且必須。

以Thermo CryoMed系列程序降溫儀中的較為常用的Profile #1為例：

 

 

 

 

在這個程序中可以看出，整個程序設(shè)置參考了兩個不同溫度探頭的測試數(shù)據(jù)。比如Step2中，一般需要等待樣本溫度和腔體溫度一同降至4℃才可以開始下一步驟。后續(xù)我們解讀曲線時就可以看出兩個溫度探頭在不同階段的溫差相當(dāng)大，我們在進(jìn)行程序優(yōu)化時，考察兩條曲線的位置并作出合理調(diào)整，是程序優(yōu)化的重要步驟。

有些客戶之前有使用過程序降溫儀，但是仍然對于樣本溫度探頭的使用必要性存在質(zhì)疑。因為之前的使用經(jīng)驗表明，其實兩條溫度曲線測到的溫度很接近。這種情況很可能是因為探頭選擇或者使用不當(dāng)造成的。

以細(xì)胞程序降溫中常用的凍存管和血袋凍存為例。

血袋凍存

血袋樣品溫度探頭需壓于血袋下方，并確保片狀光滑面（無探頭線突出來的一面）緊貼血袋。

 

另外，因為血袋為軟結(jié)構(gòu)，在凍存過程中發(fā)生相變會膨脹，所以務(wù)必使用可夾緊的血袋卡盒進(jìn)行程序降溫。如血袋不同位置的膨脹情況不同，可能導(dǎo)致凍存曲線無法正確顯示溫度變化過程，不利于后續(xù)的程序優(yōu)化。

 

 

 

 

 

CryoMed血袋冷凍框

 

 

其次是樣本轉(zhuǎn)移的問題。

有些客戶覺得程序降溫完成之后的樣本轉(zhuǎn)移過程比較復(fù)雜，希望用現(xiàn)有的凍存盒進(jìn)行程序降溫，后續(xù)可以直接轉(zhuǎn)到液氮中進(jìn)行存儲。我覺得這是個非常好的想法，不幸的是針對這一問題，正確答案是不可以。

 

 

 

 

程序降溫儀中推薦使用的凍存管架

 

 

 

 

Nalgene凍存盒

 

 

 

 

程序降溫過程中的關(guān)鍵步驟就是優(yōu)化樣本溫度和腔體溫度之間的關(guān)系。程序開始時，必須在樣品溫度與腔體溫度都靜置到相同的第一步溫度時，才能再次按RUN開始第二步的降溫。隨著樣本溫度降低，潛熱點開始出現(xiàn)。潛熱點應(yīng)該出現(xiàn)在緩慢降溫的第二步結(jié)束進(jìn)入快速拉大溫差的第三步前期。如潛熱點位置出現(xiàn)時刻不對，可根據(jù)凍存曲線圖調(diào)整第二步的結(jié)束溫度點，形成新的優(yōu)化程序，并跑新樣品驗證。

 

 

 

 

程序降溫曲線雖然很重要，但是復(fù)蘇率才應(yīng)該是檢驗程序降溫過程最重要的標(biāo)準(zhǔn)。所以有時即使曲線稍有異常，但只要復(fù)蘇效果好，也不要過于執(zhí)著于曲線的完美啦。

最后，大家如對程序降溫曲線優(yōu)化還有任何問題，歡迎隨時聯(lián)系交流。